1974年2月23日祖峰出生于江苏南京,中学就读于南京市金陵中学。祖峰海报1991年起在南京汽车制造厂工作四年。1996年至2000年就读于北京电影学院表演系,担任团支书一职。2000年至2006年留校任教,教授表演和台词,马苏,姚笛曾为他的学生。2006年研读北京电影学院首届MFA表演专业研究生。
1997年参演个人首部话剧《四季爱情》,1999年参演个人首部电影《鲁镇传说》,饰恶气痞气的富家恶少丁家昌。2001年主演电视电影《十面埋伏》,分饰两角——明朝著名琵琶演奏家汤应曾和阿桂；主演电视剧《高原骑兵连》,饰骑兵军官徐立平。2003年参演电视剧《沉默的证人》,饰精神分裂病人石隐。2005年参演电视剧《温暖》和《沙家浜》。2006年主演话剧《我爱爱情》,饰男主角小P；与刘涓共同执导数字电影《和顺的夏天》和《掌声响亮》。祖峰剧照2007年参演话剧《北京大爷》,饰欧日华；该剧演员全部为北京电影学院06级MFA表演专业在读研究生。2008年参演并执导电影《轮椅上的奇迹》,饰身患绝症的击剑教练许烽。参演电视剧《潜伏》,饰锋芒毕露的军统特务李涯；成功塑造了一个执着坚定的反派人物,并荣获2010年华鼎奖最佳男配角奖。同年8月参演电视剧《密战》,饰国际商业间谍兼冷酷杀手蝴蝶。2009年主演《宝贵的秘密》,饰山村青年照相师蓝宝贵。同年7月参演电视剧《隐形将军》,饰玩世不恭的富家公子哥儿韩奎,逐渐成长为优秀的共产党地下工作者。同年9月参演郑晓龙执导电视剧《金婚风雨情》,饰迂腐痴情的南方知识分子季诚。2010年参演话剧《四世同堂》。同年2月参演电视剧《旗袍》,饰从投身革命的富家公子到投敌叛变的阴险叛徒赵世杰再次获2011年华鼎奖最佳男配角奖。同年8月参演电影《建党伟业》,饰学生领袖邓中夏。同年10月主演孔笙执导的电影《天上的伙伴》,饰自闭症女孩陆小荷的父亲。祖峰日常照2011年2月参演孔笙执导电影《北川重生》。同年5月主演话剧《爱情的印象》,祖峰一人分饰8个不同角色。同年6月主演电视剧《时尚女编辑》,饰摄影师艾崇文。12月参演娄烨执导《浮城谜事》,饰警察童明松。2012年5月主演电视剧《独狼》,饰枪王之王林杰森。同年12月参演电视剧《婚战》,饰编辑孟三力。2013年1月参演许鞍华执导电影《黄金时代》,饰演东北作家罗烽。同年4月,第三度与孔笙导演合作,参演电视剧《北平无战事》饰崔中石,演绎了一位外表温润优雅,不畏生死的中共地下党,获得2014年国剧盛典年度最佳男配角。同年8月参演电视剧《谋圣鬼谷子》,饰姬元伯。同年9月参演张艺谋执导电影《归来》,饰反派邓指导。2014年8月参演电视剧《刑警队长》,饰刑警胡德强。同年9月至2015年2月,客串郑晓龙执导电视剧《芈月传》,饰屈原。10月在电视剧《北平无战事》中饰演“崔中石”获国剧盛典年度最佳男配角。同年11月至2015年2月参演电视剧《毕业歌》,饰中统特务头子季家鸣。2015年5月参演电视剧《双刺》,出演暖男特工彭刚。同年参演电视剧《虎妈猫爸》,饰演胜男同学。2017年5月参演电视剧《欢乐颂2》,饰演奇点一角。2018年1月参演的电影《无问西东》上映。7月播出电视剧《面具》,饰演军统潜伏特务李春秋。2019年4月18日,其执导的电影处女作《六欲天》入围了第72届戛纳电影节“一种关注”单元；8月23日,与周迅,吴镇宇领衔主演电影《保持沉默》上映,片中饰演制作人田景程；9月26日,其执导并主演的电影《六欲天》宣布定档11月1日内地上映,定档预告及海报同时发布。2019年11月,出演现实题材电视剧《在不安的世界安静的活》。2021年1月12日,参演的脱贫攻坚剧《山海情》播出,在剧中饰演白崇礼。5月4日,参演电视剧《理想照耀中国》播出。7月1日,参演的电影《1921》上映,饰演董必武；7月30日,其参演的《盛夏未来》上映,饰演王叔叔。9月30日,参演电影《我和我的父辈》；10月13日,与段奕宏,郝蕾,吴越,邢岷山等主演的家庭悬疑网剧《八角亭谜雾》在爱奇艺迷雾剧场播出。12月20日,参加纪实节目《凌晨零点零零后》。2022年1月5日,主演的电影《家庭简史》开机；3月,出演的冰球题材电影《父子雄冰》发布概念版海报；10月12日,参演的纪录片《这十年幸福中国》上线。12月18日,参演的《迷雾剧场》官宣全新阵容。2023年1月16日,领衔主演的电影《老枪》官宣阵容,在剧中饰演顾学兵。4月12日,出演的北京国际电影节主题短片上线。10月18日,参演的电视剧《仿生人间》播出。杂志图片电影剧照祖峰参加活动照片
2010年5月,祖峰与中央戏剧学院老师刘天池结婚。祖峰性格内向,话不多。平日喜好练书法,篆刻,抄经,听戏,读书。他一直喜欢写信,大学读书期间每周都会给父母写家信报平安。祖峰用毛笔写给妻子的信,精致的小楷,文辞像古体诗一样优美。由于爱写字,刻章,祖峰自然对砚台以及章料石头有着兴趣。
出生在“六朝古都”南京的祖峰,这个城市厚重历史底蕴所累积出来的沉稳,内敛却在他身上得到了极好的体现。祖峰是一个优秀演员,虽然是个“内秀”的实力派,但他的身上显现的却是作为文人的一种硬气与执着。祖锋写真集他是个兼备思考性与创造性的好演员。祖峰的出彩总是默默的,在不张扬的动作,说话语调中,他通过眼神,身体语言等细微处理营造出来的整体氛围,总会让他扮演的人物活灵活现。荧幕上的祖峰从来不是一个个性演员,因为他真真正正在诠释每一个“角色”,他演的不是自己,而是千万剧中人。在《北平无战事》播出后,祖峰饰演的“崔中石”收获业内外的好评,他赋予这个人物温润如玉,波澜不惊的气质,惊艳的演出获得观众喜爱。
祖峰遭冒名发微博言论事件祖峰遭冒名发微博言论事件2016年5月8日凌晨,北京君为天美文化经纪有限公司官方微博针对有人冒祖峰之名对电视剧与网友进行讨论的行为发表声明：祖峰在新浪及其它平台没有注册微博及相关账号,任何以祖峰名义发出相关微博言论内容均不代表祖峰本人。