陶慧敏古装照1966年,陶慧敏出生于瑞安城关解放路县前头一个工人家庭。她自幼喜欢唱歌跳舞,小学二年级起就经常登台表演。1978年,瑞安越剧团在城关五小设点招生,报名者有数千人,陶慧敏成为这批报名者中惟一被录取的女生。陶慧敏虽然胆小,却不怕苦,练功不知疲倦,经常去“偷戏”。4年后,陶慧敏提前一年转为越剧团正式演员。1982年,陶慧敏凭借在越剧《送灯》中的出色表演,先后荣获温州地区优秀小百花奖,浙江省小百花奖。她开始在浙南越剧界崭露头角。1982年,浙江省组队赴港交流演出,当时省文化厅从全省各地的越剧团中抽调了一批优秀年轻演员组建浙江越剧演出团,陶慧敏也在其中。浙江越剧演出团在香港的演出结束后,按理演出团应解散,但省文化厅领导觉得太可惜,就把这批人留下来,送到浙江艺术学校集中培训,并于1984年正式成立了浙江省小百花越剧团。在小百花越剧团,陶慧敏凭着勤奋好学,聪慧敏锐成为最具潜质的越剧演员之一。1982年,越剧《五女拜寿》搬上银幕是她从舞台走向更绚丽的银幕生涯的好机遇。在长影拍摄《五女拜寿》后,她又拍摄了电影《美丽的囚徒》,陶慧敏由此开始走向银幕。
1989年,因参演电视剧《杨乃武与小白菜》而被观众关注；同年,主演电影版《红楼梦》,饰演多愁善感的林黛玉。1992年,参加1992年中央电视台春节联欢晚会,与邓婕,朱世慧,马兰表演戏曲歌舞《庙会风光》。2000年,在电视剧《福禄双全》中扮演女主角。2002年,与王志文,许晴,巍子参演电视剧《DA师》。2003年,荣获江苏省十大杰出青年,江苏省新长征突击手称号。2004年,参演电视剧《追日》,在剧中塑造了一名全新的女军人形象；同年,参演的话剧《虎踞钟山》入围2003—2004年度国家舞台艺术精品工程初选剧目。陶慧敏2006年10月28日,出席第十五届中国金鸡百花电影节颁奖典礼。2007年,参演电视剧《霓虹灯下的哨兵》,陶慧敏首次以反派角色的特务曲曼丽形象出镜。2008年,主演电视剧《古堡情事》,在剧中扮演女主角艾艾。2009年3月,与高昊领衔主演现代家庭苦情剧《情之债》,在剧中与高昊饰演一对苦命母子；同年,主演环保事业题材电视剧《人民利益》,饰演一位“贤内助”；12月9日,与林永健,戴娇倩主演的电视剧《战地浪漫曲》在天津卫视首播。2010年,与陈键锋,佟丽娅,黄文豪等出席电视剧《烟雨斜阳》开播发布会；同年,加盟电视剧《衣被天下》,饰演一名单亲妈妈。2011年,应制作人李湘邀请,在电视剧《一不小心爱上你》中饰演家境贫寒的妈妈万红霞,与翁虹,张翰,江铠同等对戏,而这也是陶慧敏首次参演青春偶像剧；同年,参演电影《妈妈们的青春往事》,在片中出演女一号；同年,与冯绍峰,杨幂,迟帅合作出演时尚都市剧《命运交响曲》,在剧中出演安琪,安娜两姐妹的母亲“郝星雨”。8月10日,签约吉林加一土产有限公司,成为加一有机人参形象代言人。2012年,主演电视剧《幸福绽放》,饰演祁母；同年,出演都市情感伦理剧《真爱无敌》,在剧中饰演一个很爱发飙的妈妈；同年,参加录制深圳卫视《大牌生日会》。2013年,主演电视剧《我是机器人》,饰演郑正；同年,参演的电视剧《江湖正道》播出,饰演牛桂花；同年,参演家庭伦理剧《有你才幸福》,饰演京剧票友宋茹君；同年,与田小洁客串出演《爱情最美丽》,演绎马锦魁与牛美丽的前度故事。2014年3月29日,陶慧敏领衔主演的励志电影《抱养奇缘》在山西开机,在片中饰演百般刁难,蛮不讲理的农村妇女叶兰；4月,与陈冠霖,万美汐,毛晓彤等主演谍战大戏《代号九耳犬》,饰演一位来中国寻子的日本母亲；同年,参演家庭情感轻喜剧《家宴》,剧中陶慧敏与王全有携手谱写了一段跨越三十年的“倾世绝恋”。2016年7月1日,与李雪健合作主演根据开国少将甘祖昌和妻子龚全珍的真实事迹创作的故事片《老阿姨》,饰演龚全珍。2018年,出演电视剧《你和我的倾城时光》,饰演耿兴敏；9月21日,参演的电影《悲伤逆流成河》上映。2019年4月14日,与郭冬临共同主演的电影《恶魔天才》上映；9月,与归亚蕾,杨玏,邱林,徐才根合作主演阿年执导的电影《拿摩一等》；同年,参演电影《直击现场》。2020年,参演电影《晚春》。2021年,参演家庭亲情电影《醒来2》；5月3日,参演电视剧《温州三家人》播出；6月18日,参演电影《守岛人》上映；9月10日,与潘阳,许绍洋,陈国坤等联合出演的见义勇为题材的热血电影《直击现场》上映；9月24日,与吕梓航,阎青妤,赵晓明等主演的青少年法治教育电影《冬雪暖阳》上映。2021年12月20日,华鼎奖集团在澳门公布了第32届华鼎奖·上汽大众新威然之夜中国百强电视剧满意度调查发布盛典的专家评委会阵容,陶慧敏担任第32届华鼎奖评委。2022年4月,参演电视剧《幸福的愿望》；参演电影《十年一品温如言》；8月28日,参加第17届中国长春电影节闭幕式暨颁奖典礼,担任最佳导演奖颁奖嘉宾；8月1日,参演电视剧《第二次拥抱》播出；10月30日,参加的《中国好声音越剧特别季》在浙江卫视播出。2023年3月31日,担任第三届新时代国际电视节斑彩螺奖专家评委；5月3日,参演电视剧《平凡之路》播出。6月15日起,特别出演的《鱼生知有你》在优酷全网独播。10月3日,参演的《甜蜜的你》在湖南卫视＆芒果TV双平台独播。
陶慧敏的现任丈夫是舞蹈家王设忠。
陶慧敏给人秀外慧中的感觉,荧屏形象温婉。陶慧敏饰演各种角色信手拈来游刃有余,尤其是在不少家庭剧中成功塑造了“真善美”的传统母亲形象,令其成为观众喜爱的“母亲专业户”。