何赛飞出生于浙江省舟山市岱山县,家里有三个女孩,她排行第二。1967年何赛飞的父母离异,她跟随父亲生活。在她十六岁的时候,越剧电影《红楼梦》,《碧玉簪》在农村放映,何赛飞看完后常回家给父亲学上几段,原本做文化工作的父亲看到她乐感挺不错就支持她去报考越剧团。1982年何赛飞考入浙江岱山越剧团。1983年调入浙江小百花越剧团。1985年何赛飞从浙江艺术学校戏曲表演专业毕业。
何赛飞越剧1984年,主演越剧电影《五女拜寿》而获得关注。1986年,导演谢铁骊启动电影《红楼梦》,共六部八集的电影拍摄历时3年,招入了越剧,京剧,吕剧等不同剧种的演员,何赛飞便是其中之一。片中她饰演妙玉,这是她走上银幕的开始。1991年,参演张艺谋执导的电影《大红灯笼高高挂》,在片中饰演梅珊一角。1994年,主演李少红执导的电影《红粉》和陈凯歌执导的电影《风月》。在《红粉》中,她饰演青楼女子小萼,演得不温不火,恰当好处,这部影片也进一步提高了她的知名度。参演电视剧作品1995年,她获得中国电影表演艺术学会奖。1996年,她凭借在《敌后武工队》中的表演获得第19届大众电影百花奖最佳女配角奖；同年参演电视剧《情系国脉》,《汉口往事》,《昨日留言》。1999年,主演电视剧《情迷海上花》。2000年,参演电视剧《爱是阳光》,并在剧中饰演女主角。2001年,在郭宝昌导演的电视剧《大宅门》中饰演名妓杨九红,凭借在这部电视剧中的表现,何赛飞获得中央电视台美菱杯“观众最喜爱的十佳女演员奖”。2002年,主演电视剧《孝庄秘史》,在剧中饰演皇太极最宠爱的宸妃海兰珠。2003年,参演郭宝昌执导的电视剧《大宅门第二部》,在剧中饰演杨九红。何赛飞2004年,主演电视剧《月影风荷》,在剧中饰演季文月一角。2005年,主演电视剧《血色残阳》。2007年11月,与汤唯,梁朝伟合作出演李安导演的电影《色戒》,在片中饰演萧太太一角。2007年12月,何赛飞到宁波出演滑稽戏《太太万岁》；同年主演电视剧《江湖兄弟》,剧中何赛飞与施羽饰演一对在江湖中飘泊的恋人。2008年,主演电视剧《祈望》和《纸醉金迷》。2009年,主演电视剧《娘家的故事》和《侬本多情》。2010年,主演电视剧《老马家的幸福往事》。2011年,主演电视剧《新女婿时代》和《后宫》。2012年,出演电视剧《女人泪》和《唐宫燕》,在剧中饰演唐中宗李显的妻子韦皇后。2013年,与佟丽娅,杨烁合作出演电视剧《刀客家族的女人》；4月,何赛飞主演的电视剧《那金花和她的女婿》在全国各大卫视黄金档播出。2015年,加盟主演抗战题材电影《那些女人》,在片中饰演水芹娘；10月,主演的喜剧《二毛驴从军记》在横店杀青。2016年6月,主演电视剧《老妈的桃花运》,在剧中饰演丁香香；12月,主演情感题材电视剧《最亲最爱的人》,在剧中饰演甄婕的生母张锦屏。2017年1月27日,参与中央电视台春节联欢晚会,表演戏曲《薪火相传》。2018年9月28日,凭借电影《那些女人》获得第16届平壤国际电影节最佳女主角奖。2021年2月18日,与海清,任重共同主演的电视剧《甜蜜》在中央电视台电视剧频道播出；8月5日,获得首届澳涞坞国际电视节金萱奖建党百年全国优秀电视剧女演员。2022年7月28日,领衔主演的电影《追月》入围第12届北京国际电影节“天坛奖”主竞赛单元；8月10日,参演剧集《民国大侦探》在爱奇艺播出；8月13日,参加第12届北京国际电影节开幕式红毯；8月15日,参加中国·北京电影之夜；8月20日,参加第12届北京国际电影节闭幕式红毯暨颁奖典礼；8月27日,参加的沉浸式戏曲研学创演真人秀《拿手好戏》在CCTV-3综艺频道首播；11月6日,参加央视文化节目《诗画中国》；11月12日,参加第35届中国电影金鸡奖闭幕式颁奖典礼及红毯仪式,担任颁奖嘉宾；12月14日,参加首届华语纪录电影大会颁奖典礼及红毯仪式,担任颁奖嘉宾；12月31日,获得第12届北京国际网络电影展最佳表演艺术演员奖。2023年1月,参加2023百花迎春,表演黄梅戏《女驸马》。3月20日,友情出演的电视剧《人生之路》播出。3月23日,出演的电影《川流不“熄“》发布定档预告,宣布将于5月26日上映。2023年4月7日,参加以“凝心聚力,共生共长”为主题的无忧之夜2023晚会盛典,表演节目《临安的夜与韵》；5月14日,参加的《经典咏流传·正青春》第三期播出；5月20日,友情主演的电视剧《正好遇见你》播出。5月18日至24日,参加《戏聚高平·擂响中华——中国梆子大会》担任比赛评委。
2004年8月,担任第10届华表奖评委。2017年1月,当选上海市政协委员。3月,当选中国电视艺术家协会演员工作委员会常务理事。9月,担任第11届亚太电影大奖评委。2021年12月,担任第32届华鼎奖专家评委。12月,任中国电视艺术家协会演员工作委员会执行委员。2023年9月,当选中国文艺志愿者协会第三次全国代表大会理事。
何赛飞何赛飞漂亮,大气,端庄。在越剧界,她是一位“名角”,转战影视圈她同样取得了不错的成绩。她塑造的角色跨越了年龄,从倾国倾城的美人到家长里短的婆婆,她赋予了每一个角色鲜活的生命。她出色的演技不仅打动了观众,也奠定了她实力派演员的地位。